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【手把手教】中国食品微生物菌落总数、大肠菌群等标准的【理解要点】！
2023-12-12 17:12:58 点击量:
GB 4789.2-2022
液体样品可直接取原液进行检验；固体或者半固体则必须依据检验经验，选取1-3个适宜稀释度进行检验（一般样品选取1:10,1:100,1:1000三个稀释度进行检验。若遇到不常做的样品，可适当延长稀释度至1：10000甚至更大）。
分别吸取1mL灭菌生理盐水到平皿中做空白对照，若空白有菌落生长则该实验无效。
根据对样品污染情况的估计，若样品有表面蔓延生长的可能性，则待第一次倾注的琼脂凝固后，可在表面再覆盖一层琼脂以避免菌落蔓延而难以计数。
本标准的难点在于菌落计数及计算。
1）菌落计数时，从低稀释度的平板开始计数。若所有平板上的菌落数均小于30CFU，则需计数所有平板上的菌落数，但仅采用最接近30CFU的两个平板的菌落数来计算最终菌落数。
2）当第一稀释梯度一个板上菌落数高于30，另一个低于30，则依据标准应当以介于30-300之间的菌落数作为该稀释梯度的菌落数。
3）若所有平板上的菌落数均大于30CFU，则只计数30-300CFU之间的平板上的菌落数，并采用这些数据，依据标准中给出的公式，进行最终菌落总数的计算，此时将大于300CFU的记为“多不可计”，以TNTC表示。
4）若所有稀释度的平均菌落数都大于300，则不能所有都记为TNTC，必须将最高稀释度的两个平板上的菌落数逐一的计数，再计算平均数，该平均数为该梯度的菌落总数，其余平板上的菌落数可记为TNTC。
5）若所有平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数。
注意：对于该情况，一直存在争议，不同的检验人员可能做法不一，有人保留为5CFU，有人保留为10CFU，并无固定做法，建议实验室保持一贯做法，不要随意更改。
GB 4789.3-2016
第一法 大肠菌群MPN法
1、取样原则：本标准中对应的检样量分别为0.1g（mL）、0.01g（mL）、0.001g（mL），根据样品限量值，查阅附录部分MPN表：
（1）无论固体或液体，当限量值为“＜3.0”或其它任意能在标准“表1”中查到的数值，则分别取1mL 1：10的样品匀液接种到3管单料LST肉汤管、分别取1mL 1：100的样品匀液接种到3管单料LST肉汤管、分别取1mL 1：1000的样品匀液接种到3管单料LST肉汤管；
（2）无论固体或液体样品的限量值为“＜0.3”或其它任意为MPN表中查到的数值缩小10倍的数值，则分别取10mL样品1:10稀释液接种到3管双料LST肉汤管、分别取1mL 1：10的样品匀液接种到3管单料LST肉汤管、分别取1mL 1：100的样品匀液接种到3管单料LST肉汤管（如蜂蜜的限量值为0.3MPN/g，即采取此做法）。
2、凡产酸或产气的LST管，都取1环接种GBLB肉汤管，凡BGLG产气者记为阳性。
常见问题汇总
建议新手们认真按照标准进行证实实验，此证实实验操作简单，每一次VRBA上有菌落生长都进行证实实验，如此往复3-4次，对于哪种形态才是大肠菌群均可了然于心。
选取15-150CFU之间的平板，挑选可疑菌落进行证实实验。举例如下：
注意：A. 每种可疑菌落挑取5个，每个菌落放入1根GBLB管中；B. “产气者，记为大肠菌群阳性管‘’，就要求在实验前必须认真筛选BGLB管，凡产气的GBLB管应弃去不用。
选取适宜菌落数的平板挑取菌落进行证实试验，若证实全部为阴性，则需要再挑取更低稀释度的平板上的菌落，建议可疑和典型菌落分别挑取10个进行验证试验，若第二次证实实验均呈阴性，以＜1乘以最低稀释度进行计算。