内容

2016

2025

主要变化

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本标准代替 GB 4789.42—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》。
本标准与 GB 4789.42—2016 相比，主要变化如下：
—— 修改了标准的适用范围；
—— 增加了过程控制病毒和诺如病毒 GⅠ 基因组检测用探针；
—— 修改了 “软质水果和生食蔬菜” 的前处理步骤和检验结果的判定。

范围

本标准规定了食品中诺如病毒（Norovirus）的实时荧光 RT-PCR 检测方法。
本标准适用于贝类，生食蔬菜，胡萝卜、瓜、坚果等硬质表面食品，草莓、西红柿、葡萄等软质水果等食品中诺如病毒核酸的检测。

本标准规定了食品中诺如病毒（Norovirus）的实时荧光 RT-PCR 检验方法。
本标准适用于贝类、生食蔬菜、硬质表面食品、软质水果和包装饮用水中诺如病毒的检测。

操作步骤

5.1.1.4 将振荡液转移至离心管，如体积较大，可使用 2 根离心管。10000r/min，4℃，离心 30min。
取上清至干净试管或三角瓶，用1mol/L HCl 调 pH 至 7.0。
 

5.1.1.5 加入 0.25 倍体积 5×PEG/NaCl 溶液，使终溶液浓度为 100g/LPEG，0.3mol/LNaCl。60s 摇匀，4℃，60 次 /min，振荡 60min。10000r/min，4℃，离心 30min，弃上清。10000r/min，4℃，离心 5min 紧实沉淀，弃上清。
 

5.1.1.6 500μLPBS 悬浮沉淀。如食品样品为生食蔬菜，可直接将悬浮液转移至干净试管，测定并记录悬浮液毫升数，用于后续 RNA 提取。如食品样品为软质水果，将悬浮液转移至耐氯仿试管中。加入 500μL 氯仿 / 丁醇混合液，涡旋混匀，室温静置 5min。10000r/min，4℃，离心 15min，将液相部分仔细转移至干净试管，测定并记录悬浮液毫升数，用于后续 RNA 提取。

5.2.1.4 将提取液转移至 50mL 离心管，如体积较大，使用 2 支离心管。10000×g，4℃，离心 30min。
取上清至无菌试管或三角瓶，用 6mol/L HCl 调 pH 至 7.0。
 

5.2.1.5 向提取液中加入 0.25 倍提取液体积的 5×PEG/NaCl 溶液，使 PEG/NaCl 在提取液中的终含量为 100g/LPEG，0.3mol/LNaCl。室温，摇匀 1min，然后，4℃，60 次 /min，振荡 60min 或 4℃静置过夜。10000×g，4℃，离心 30min，弃上清。10000×g，4℃，离心 5min 紧实沉淀，弃上清。
 

5.2.1.6 加入 500μLPBS 重悬沉淀。如样品为生食蔬菜，直接将重悬液转移至无 RNase 离心管中，测定并记录重悬液体积，用于后续 RNA 提取。如样品为软质水果，将重悬液转移至耐三氯甲烷的无菌离心管中，加入 500μL 三氯甲烷 / 正丁醇混合液，涡旋混匀，室温静置 5min，10000×g，4℃，离心 15min，将上清液转移至无 RNase 离心管中，测定并记录上清液体积，用于后续 RNA 提取。

操作步骤

6.2 结果判定
待测样品的 Ct 值大于等于 45 时，判定为诺如病毒阴性；待测样品的 Ct 值小于等于 38 时，判定为诺如病毒阳性；待测样品的 Ct 值大于 38，小于 45 时，应重新检测；重新检测结果大于等于 45 时，判定为诺如病毒阴性；小于等于 38 时，判定为诺如病毒阳性。
 

6.3 报告
根据检测结果，报告“检出诺如病毒基因” 或 “未检出诺如病毒基因”。

6.2 结果判定
待测样品（K 反应孔或 L 反应孔）Ct 值≥45 时，判定诺如病毒 GⅠ 或 GⅡ 基因组检测结果阴性；待测样品（K 反应孔或 L 反应孔）Ct 值≤38 时，判定诺如病毒 GⅠ 或 GⅡ 基因组检测结果阳性；待测样品（K 反应孔或 L 反应孔）Ct 值 38＜Ct＜45 时，应重复检测；重复检测结果 Ct 值≥45 时，判定诺如病毒 GⅠ 或 GⅡ 基因组检测结果阴性；重复检测结果 Ct 值＜45 时，判定诺如病毒 GⅠ 或 GⅡ 基因组检测结果阳性。
样品平行处理的检测结果，只要其中一个结果为阳性，则判定该样品诺如病毒 GⅠ 或 GⅡ 基因组检测结果阳性。
 

6.3 结果报告
根据检测结果，报告 “××g (××mL 或 ××cm²) 样品检出诺如病毒基因” 或 “××g (××mL 或 ××cm²) 样品未检出诺如病毒基因”。
 

7 其他
生物安全措施按 GB 19489 规定的要求严格执行。

附录

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附录 A 增加了过程控制病毒和诺如病毒 GⅠ 基因组检测用探针 TM9 (探针)